Die Galerie beherbergt die umfassendste Sammlung umbrischer Kunstwerke aus dem 13. bis 19. Jahrhundert, von denen die meisten aus kirchlichen Besitztümern stammen. Die enge Beziehung zwischen den religiösen und den bürgerlichen Verhältnissen im gesamten Mittelalter und für den Großteil der Neuzeit stellt jedoch sicher, dass dieses Museum nicht nur in der Region Umbrien, sondern in ganz Italien eine der besten Quellen des künstlerischen Erbes ist .

Die künstlerischen Bewegungen des 17. und 18. Jahrhunderts werden von Künstlern wie Orazio Gentileschi, Pietro da Cortona, Valentin von Boulogne, Pierre Subleyras, Antonio Amorosi und Corrado Giaquinto vertreten. Die Galerie bietet auch verschiedene Spezialsammlungen wie Textilien, Dokumente und Karten sowie eine Schatzkammer mit wertvollen Kunstwerken aus anderen Stadtmuseen und Kirchen.

Erwähnenswert sind die Werke einiger bedeutender Künstler des Mittelalters und der Renaissance, wie der Meister von San Francesco, Arnolfo di Cambio, Duccio di Buoninsegna, Gentile da Fabriano und Beato Angelico, Piero della Francesca. Es gibt viele Meisterwerke von Pietro Vannucci, besser bekannt als Perugino, und von seinen Anhängern und anderen lokalen Künstlern, von denen der wichtigste Bernardino di Betto ist, genannt Pintoricchio. Interessant ist die Cappella dei Priori, eine von Benedetto Bonfigli mit Fresken bemalte Kapelle, mit Szenen aus dem Leben von Saint Ercolano und Saint Louis von Toulouse, einem Beispiel für lokale Geschichte und Stadtplanung.