La galería alberga la colección más completa de obras de arte de Umbría que datan de los siglos XIII y XIX, la mayoría de las cuales provienen de propiedades eclesiásticas. Sin embargo, la estrecha relación entre los ámbitos religioso y civil a lo largo de la Edad Media y durante la mayor parte de la era moderna garantiza que este museo sea uno de los mejores depósitos del patrimonio artístico, no solo de la región de Umbría sino del país en general. .

Los movimientos artísticos de los siglos XVII y XVIII están representados por artistas como Orazio Gentileschi, Pietro da Cortona, Valentín de Boulogne, Pierre Subleyras, Antonio Amorosi y Corrado Giaquinto. La Galería también presenta varias colecciones especiales, como textiles, documentos y mapas, y un Tesoro con obras de arte preciosas de otros museos e iglesias de la ciudad.

Destacan las obras de algunos de los artistas más importantes de la Edad Media y el Renacimiento, como el Maestro de San Francisco, Arnolfo di Cambio, Duccio di Buoninsegna, Gentile da Fabriano, Beato Angelico, Piero della Francesca. Hay muchas obras maestras de Pietro Vannucci, mejor conocido como Perugino, y de sus seguidores y otros artistas locales, el más importante de los cuales es Bernardino di Betto, llamado Pintoricchio. Interesante es la Cappella dei Priori, una capilla pintada al fresco por Benedetto Bonfigli, con escenas de la vida de San Ercolano y San Luis de Toulouse, un ejemplo de la historia local y la planificación urbana.