La galerie Doria-Pamphilj est située dans le palais du même nom, construit entre le milieu du XVe et le début du XVIIIe siècle, qui appartenait auparavant à la famille Della Rovere, puis propriété de la famille Aldobrandini à partir de 1601 et de la famille Pamphilj à partir de 1647, après le mariage entre Olimpia Aldobrandini et Camillo Pamphilj.

En 1651, Giambattista Pamphilj, après avoir gravi le trône pontifical avec le nom d'Innocent Dix (1644-1655), y établit la Galerie. La branche Doria Pamphilj a remplacé la descendance directe de la famille Pamphilj en 1760.

La disposition des peintures de la galerie est répartie sur quatre ailes et suit les indications fournies dans un document du XVIIIe siècle, où l'emplacement exact de chaque oeuvre est spécifiée selon un critère de symétrie et parfois d'affinité typologique et stylistique.

Il comprend des peintures de Raphaël (Portrait d'Andrea Navagero), Titian (Salomé avec la tête de saint Jean-Baptiste), Domenichino (Susan et les vieillards), Parmigianino (Vierge à l'Enfant, Nativité) , Caravaggio (reste pendant la fuite en Egypte, saint Jean-Baptiste et Madeleine), Annibale e Ludovico Carracci (satyre et berger, Madone avec l'enfant, saint Sébastien), Mattia Preti (Madeleine repentante, saint Jean Baptiste , Christ conduit sur la Scala Santa), Guercino (Erminia trouve Tancred blessé, Allégorie du printemps, Retour du fils prodigue, St Joseph), Guido Reni (Madone adorant l’enfant, St Pierre repentant, Amour sacré et profane), Velazquez (portrait d'Innocent Dix), Brueghel l'Ancien (Paysages), Gaspard Dughet (Paysages). Les sculptures antiques et du XVIIe siècle, comprenant quelques sarcophages et bustes, telles que les deux d’Innocent XII de Gian Lorenzo Bernini et Alessandro Algardi sont exposées. Les quatre tapisseries du XVIe siècle fabriquées à Bruxelles et représentant les phases qui ont précédé et conclu la bataille de Lépante sont remarquables.